产品介绍

微小RNA测序(miRNA-Seq)是一种用于研究微小RNA(miRNA)表达的高通量测序技术。miRNA是一类短小的非编码RNA分子,在基因调控、细胞生命周期、发育和疾病等多个生物学过程中发挥重要作用。

本公司优势

1)高质量的数据生成

2)完备的覆盖范围

3)多维度的数据分析

4)专业的数据解读

5)报告以及定制化的服务

分析流程

1)数据预处理:对原始测序数据进行质量控制和过滤,去除低质量的读段、接头序列和重复序列等。同时,还可以对数据进行去除rRNA序列的操作,以减少干扰。

2)序列比对:将预处理后的测序数据与miRNA数据库(如miRBase)进行比对,使用比对工具(如Bowtie、BWA、STAR等)进行序列比对。这一步骤将确定每个读段的来源位置,并将其映射到miRNA上。

3)表达量计算:根据比对结果,统计每个miRNA的读段数或覆盖度,来估计其表达量。常用的方法包括RPKM(Reads Per Kilobase of transcript per Million mapped reads)或FPKM(Fragments Per Kilobase of transcript per Million mapped fragments)。

4)差异表达分析:通过比较不同样品之间的miRNA表达量,可以鉴定差异表达的miRNA。常用的差异表达分析方法包括DESeq、edgeR等。这些方法可以根据统计学模型,识别差异表达miRNA并计算其显著性。

5)功能注释和富集分析:对差异表达的miRNA进行功能注释,即将其映射到已知miRNA的功能注释数据库中,如miRBase、TargetScan等。此外,还可以进行富集分析,寻找差异表达miRNA在特定生物过程、通路或功能上的富集情况。

6)结果验证:通过实验验证差异表达miRNA的生物学功能和调控机制,例如,通过定量PCR、Northern blot等方法验证测序结果的准确性和可靠性。

应用方向

1)miRNA表达调控研究: miRNA-Seq可以用于分析不同细胞类型、发育阶段、生理状态或疾病状态下miRNA的表达变化,帮助了解miRNA在基因调控中的作用。

2)miRNA与疾病关联研究: 通过比较疾病患者和正常对照组的miRNA表达数据,可以鉴定与疾病相关的miRNA,从而深入了解miRNA在疾病发生机制中的作用。

3)miRNA与细胞周期、凋亡和分化研究: miRNA-Seq可以帮助了解miRNA在细胞周期、凋亡和分化等生物学过程中的功能。

4)miRNA与癌症研究: miRNA在多种癌症中表达异常,miRNA-Seq可以揭示癌症中miRNA的表达变化,从而了解miRNA在癌症发展中的作用。

5)miRNA与药物治疗研究: 了解miRNA在疾病中的作用有助于研发针对miRNA的治疗策略,如使用miRNA作为治疗靶点或调控剂。

6)miRNA调控网络分析: 通过miRNA-Seq数据,可以构建miRNA与靶基因之间的调控网络,深入了解miRNA的调控机制和作用。

7)miRNA与免疫系统研究: miRNA在调节免疫应答、炎症和免疫细胞分化中发挥重要作用,miRNA-Seq有助于研究miRNA在免疫系统中的功能。

8)miRNA作为生物标志物的应用: 一些miRNA在特定疾病状态下表达明显变化,可以作为潜在的生物标志物,用于疾病的诊断和监测。

应用案例

A fecal miRNA signature by small RNA sequencing accurately distinguishes colorectal cancers: results from a multicentric study(Gastroenterology,2023,IF=33.883)

通过小RNA测序的粪便miRNA标记准确区分结直肠癌:来自多中心研究的结果

目前用于结直肠癌(CRC)筛查的粪便检测在检测早期肿瘤或癌前病变方面的准确性有限。在这方面,作者全面评估了粪便microRNA (miRNA)谱作为非侵入性结直肠癌诊断的生物标志物。在多个生物标本中共进行了1273次小RNA测序实验。在一项横断面研究中,对来自意大利和捷克队列的粪便样本(155例结直肠癌,87例腺瘤,96例其他肠道疾病,141例结肠镜阴性对照)的miRNA谱进行了研究。25个miRNA在CRC患者的粪便中显示改变的水平,包括miR-149-3p、miR-607-5p、miR-1246、miR4488和miR-6777-5p在内的五种miRNA特征将患者与对照组区分开来,并在独立队列中得到验证。该特征将对照组从低/高分期肿瘤和晚期腺瘤中区分出来(AUC=0.82, 95% CI=0.71-0.97)。组织miRNA谱反映了粪便样本的miRNA谱,而不同胃肠道疾病的粪便谱突出了CRC中特异性失调的miRNA。FIT剩余样品中的miRNA谱与保存缓冲液中收集的粪便的miRNA谱具有良好的相关性,并且在腺瘤或CRC患者中可以检测到它们的改变。

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